|
ELISA试(shi)验(yan)以(yi)灵(ling)敏度较高、特(te)异(yi)性较好的(de)(de)特(te)点在临床上(shang)得到了广泛(fan)的(de)(de)应用(yong)，但操作中的(de)(de)各个(ge)环节(jie)对试(shi)验(yan)的(de)(de)检测效果(guo)(guo)影(ying)响(xiang)较大(da)，如不注(zhu)意，有可(ke)能导致显(xian)色不全(quan)、花板等结(jie)(jie)果(guo)(guo)。下面分析Elisa试(shi)验(yan)操作中可(ke)能影(ying)响(xiang)结(jie)(jie)果(guo)(guo)的(de)(de)原因(yin)，并(bing)给出相应的(de)(de)解决办法。
1 选择试(shi)剂(ji) 选择质量优良的检(jian)测试(shi)剂(ji)，严格按照(zhao)试(shi)剂(ji)说(shuo)明书(shu)进行操(cao)作(zuo)，操(cao)作(zuo)前将试(shi)剂(ji)在室温下(xia)平衡30-60分钟。
2 加样(yang) 可能(neng)原(yuan)因： 1）血(xue)清(qing)或(huo)血(xue)浆标(biao)本分(fen)(fen)离不(bu)好(hao)即进(jin)行加样(yang)； 2）手工操(cao)作(zuo)(zuo)中，加样(yang)板过(guo)多(duo)造(zao)成加样(yang)后放入孵(fu)箱前等待时(shi)(shi)(shi)间(jian)过(guo)长(特别是室内温(wen)度较高时(shi)(shi)(shi))； 3）加完(wan)标(biao)本再加酶(mei)试剂(ji)时(shi)(shi)(shi)酶(mei)溅出(chu)孔外。 解(jie)决(jue)办法： 1） 标(biao)本为血(xue)清(qing)：最好(hao)将血(xue)液先自然存(cun)放1-2小时(shi)(shi)(shi)后，再用(yong)(yong)3000rmp离心15分(fen)(fen)钟(zhong)；标(biao)本为血(xue)浆：必须(xu)使用(yong)(yong)含(han)抗凝剂(ji)的(de)血(xue)液标(biao)本收集管，采(cai)(cai)血(xue)后必须(xu)立即颠倒采(cai)(cai)血(xue)管混合5-10次，放置(zhi)一段时(shi)(shi)(shi)间(jian)后，3000rpm离心15分(fen)(fen)钟(zhong)；若在几天内检测(ce)，可放在2-8℃冰箱中，若要贮存(cun)，则(ze)置(zhi)于-20℃的(de)低温(wen)冰箱内。 2) 加样(yang)后及时(shi)(shi)(shi)放入孵(fu)箱。 3) 加酶(mei)试剂(ji)后用(yong)(yong)吸(xi)水纸在酶(mei)标(biao)板表面轻拭吸(xi)干。 4) 如果采(cai)(cai)用(yong)(yong)AT或(huo)其(qi)他(ta)全自动加样(yang)，最好(hao)选择FAME或(huo)其(qi)他(ta)后处理仪器加酶(mei)试剂(ji)。 5) 标(biao)本较多(duo)时(shi)(shi)(shi)，请分(fen)(fen)批(pi)操(cao)作(zuo)(zuo)。
3 孵育(yu) 可(ke)能(neng)原因： 1) 孵育(yu)时(shi)(shi)未(wei)贴(tie)(tie)封片(pian)或(huo)加盖，使标本或(huo)稀释液蒸(zheng)发，吸附于孔(kong)壁，难(nan)于清(qing)洗彻底； 2) 孵育(yu)时(shi)(shi)间人为延长，导致非特(te)异性结合紧附于反应(ying)孔(kong)周围(wei)，难(nan)以清(qing)洗彻底。 解决办(ban)法： 1) 贴(tie)(tie)封片(pian)或(huo)加盖； 2) 按说明步(bu)骤(zhou)严(yan)格控制操作时(shi)(shi)间。
4 洗(xi)(xi)(xi)板(ban)(ban)(ban)(ban) 可能原(yuan)因： 1) 采用(yong)(yong)手工洗(xi)(xi)(xi)板(ban)(ban)(ban)(ban),孔与(yu)孔之间(jian)液(ye)(ye)体交叉。 2) 采用(yong)(yong)半自动洗(xi)(xi)(xi)板(ban)(ban)(ban)(ban)机洗(xi)(xi)(xi)板(ban)(ban)(ban)(ban)时(shi)(shi)，洗(xi)(xi)(xi)液(ye)(ye)量不(bu)(bu)足，导致(zhi)洗(xi)(xi)(xi)板(ban)(ban)(ban)(ban)不(bu)(bu)彻(che)底(di)；洗(xi)(xi)(xi)板(ban)(ban)(ban)(ban)针堵塞，抽(chou)吸不(bu)(bu)完全；洗(xi)(xi)(xi)板(ban)(ban)(ban)(ban)不(bu)(bu)畅，导致(zhi)洗(xi)(xi)(xi)板(ban)(ban)(ban)(ban)效果差。 3) 反(fan)应板(ban)(ban)(ban)(ban)过多造成洗(xi)(xi)(xi)板(ban)(ban)(ban)(ban)等待时(shi)(shi)间(jian)长。 解(jie)决办法： 1) 保证(zheng)洗(xi)(xi)(xi)液(ye)(ye)注满各孔，洗(xi)(xi)(xi)板(ban)(ban)(ban)(ban)针畅通(tong)，洗(xi)(xi)(xi)完板(ban)(ban)(ban)(ban)后(hou)最(zui)好(hao)在吸水(shui)纸（选(xuan)择(ze)干(gan)净、无(wu)或少(shao)尘的吸水(shui)材料）上轻轻拍干(gan)； 2) 合(he)理安(an)排(pai)，或多用(yong)(yong)几台洗(xi)(xi)(xi)板(ban)(ban)(ban)(ban)机。
5 显色(se)(se)(se) 可能原因(yin)： 1) 显色(se)(se)(se)剂(ji)(ji)配(pei)制(zhi)(zhi)后放置时间过(guo)(guo)长或使(shi)用(yong)过(guo)(guo)期显色(se)(se)(se)剂(ji)(ji)； 2) 加显色(se)(se)(se)剂(ji)(ji)时溅出孔外(wai)造成液(ye)体(ti)回流(liu)。 解决办法： 1) 显色(se)(se)(se)剂(ji)(ji)尽量在临用(yong)前配(pei)制(zhi)(zhi)，坚持不用(yong)过(guo)(guo)期显色(se)(se)(se)剂(ji)(ji)，肉眼可见浅蓝(lan)色(se)(se)(se)的TMB显色(se)(se)(se)剂(ji)(ji)不用(yong)； 2) 加样时保持显色(se)(se)(se)剂(ji)(ji)不外(wai)
[1] [2] 下一页 |
